數(shù)字PCR技術(shù)服務
來源：本站 作者：jiyuanbio 時間：2025/5/23
一、數(shù)字 PCR 技術(shù)的應用方向
- 腫瘤學研究
- 基因突變檢測：在腫瘤精準醫(yī)學的伴隨診斷中，可精準檢測如 TP53 R175H、EGFR L858R 等腫瘤驅(qū)動基因的點變異。相較于二代測序技術(shù)，數(shù)字 PCR 靈敏度可達 0.01% 甚至 0.001%，對低頻突變檢測與定量更具優(yōu)勢 。在 “液態(tài)活檢” 中，能有效減少正常體細胞 DNA 干擾，精準檢測痕量的循環(huán)腫瘤 DNA（ctDNA） 。
- 拷貝數(shù)變異（CNV）檢測：異常 CNV 是多種人類疾病發(fā)生的重要分子機制。數(shù)字 PCR 擺脫對 Ct 值依賴，直接獲取靶基因絕對拷貝數(shù)，檢測精度遠超二代測序、芯片雜交等技術(shù)，可對相關(guān)實驗結(jié)果進行有效驗證 。
- 基因融合檢測：對非小細胞肺癌患者的 ALK 融合、肺腺癌患者的 ROS1 融合等基因融合檢測具有高靈敏度與準確度，能克服免疫組化（IHC）靈敏度低、熒光原位雜交（FISH）耗時久且假陰性概率高等問題 。
- 無創(chuàng)產(chǎn)前診斷
目前基于 NGS 平臺的無創(chuàng)產(chǎn)前診斷（NIPT）精確度有限，數(shù)字 PCR 的高靈敏度和精準度為其在 NIPT 領(lǐng)域應用奠定良好基礎(chǔ)，已在脊髓性肌萎縮、血友病、鐮刀型貧血等遺傳病的無創(chuàng)產(chǎn)前診斷中展現(xiàn)卓越性能 。
- 傳染病檢測
- 病毒載量測定：可對病毒載量進行絕對定量，通過檢測單位血漿中游離病毒 RNA 拷貝數(shù)，提示病毒感染者所處時期、判定疾病進展、監(jiān)測抗病毒藥物療效及耐藥性問題 。
- 病原體檢測：在受到污染的食品和供水中，能檢測出導致人類疾病的低含量病原體，為食品安全與飲水安全提供保障 。
- 基因表達分析
可提供比實時熒光定量 PCR 更精確的基因差異表達研究，尤其適用于靶基因表達差異微小的情況，如 mRNA、microRNA、lncRNAs 等的表達分析，以及等位基因不平衡表達、單細胞基因表達分析、外泌體核酸分子定量分析等 。
- 其他應用
- 轉(zhuǎn)基因生物檢測：實現(xiàn)對植物基因突變和轉(zhuǎn)基因生物的高靈敏度檢測和絕對定量，助力農(nóng)業(yè)生物技術(shù)領(lǐng)域研究與監(jiān)管 。
- 環(huán)境監(jiān)測：可檢測土壤中經(jīng)土壤傳播的病原體和抗生素抗性基因，評估人類及生態(tài)系統(tǒng)暴露風險 。
- 基因編輯驗證：針對 CRISPR - Cas9 技術(shù)的基因編輯成果，能有效驗證基因編輯的成功性，檢測脫靶效應 。
二、數(shù)字 PCR 技術(shù)服務送樣流程
- 樣本類型及要求
- DNA/cfDNA 樣本：DNA 總量一般要求達到 10ng / 反應，濃度≥0.6ng/ul/ 反應，體積≥15ul / 反應 。
- 質(zhì)粒樣本：濃度需清晰標示并標明 “次方”，稀釋至 6 次方及以下濃度，送樣體積根據(jù)實驗需求確定 。
- 樣本編號與信息
樣本應提前規(guī)劃簡潔清晰的編號，確保檢測前核對與檢測樣本無誤。同時，需提供詳細樣本信息，如樣本類型、來源、保存條件、預期檢測項目等，以便技術(shù)人員更好處理與分析樣本 。
- 樣本運輸
根據(jù)不同樣本類型要求，選擇合適運輸方式與保存條件。需低溫保存的樣本，確保運輸全程處于規(guī)定低溫環(huán)境，如使用干冰維持低溫，防止樣本變質(zhì)影響檢測結(jié)果 。
- 樣本接收與核對
實驗室接收樣本后，技術(shù)人員將嚴格按照送樣信息對樣本進行核對，包括樣本編號、類型、數(shù)量、保存狀態(tài)等。若發(fā)現(xiàn)樣本不符合要求，將及時與送樣方溝通，協(xié)商解決方案 。
- 檢測流程啟動
核對無誤的樣本進入數(shù)字 PCR 檢測流程，包括核酸提取、反應體系配制、PCR 擴增、熒光信號檢測與數(shù)據(jù)分析等步驟，最終為客戶提供準確可靠的檢測報告 。
